一种新的抗生素有选择地杀死革兰氏阴性病原体

　　在LPS存在下，对大肠杆菌MG1655进行了A，Darobactin和多霉菌素B MIC研究。LPS的添加可拮抗多性淋巴细胞活性，而不是darobactin活性。数据是平均±S.D.一式三份实验。B，将五只小鼠组以107大肠杆菌ATCC 25922感染，随后在24小时内安乐死（如果尚未死亡），此后，肝脏和脾脏被收集，均质化并镀有C.F.U。分析。野生型大肠杆菌造成60％的死亡，并显示高C.F.U.肝脏和脾脏负担。所有三种耐darobactin的巴马突变菌株的毒力降低，在24小时内所有组的生存率为100％。三重巴马突变体的细菌负担接近器官中的检测极限，在低但可检测的水平下发现表达G429R的突变体，而在器官中相对较高的载荷下发现了表达G429V的突变体。n = 5。数据是平均值±S.D.C，BAM（BAMA -E）首先插入脂质纳米盘的BAM活性测定法示意图。然后将展开的OMPT与周质伴侣苏拉（Sura）一起与BAM -Nanodiscs混合，而BAM将OMPT折叠到纳米盘中。OMPT是一种蛋白酶，裂解了内部淬火的肽，该肽会产生荧光信号。D，BAM –纳米烟分析在存在浓度增加的darobactin（左）的情况下进行。结果表明，darobactin能够以剂量依赖性的方式特异性抑制BAM纳米烟雾活性。然后将这些数据针对“无darobactin”样品进行归一化，并绘制了Darobactin和绘制的最高浓度，并使用在线IC50计算器工具（AAT BioQuest）（右）计算了IC50。nd，纳米轴。n = 3生物学独立的实验。数据是平均±S.D.E，作为对BAM纳米盘测定的对照，我们准备了OMPT -nanodiscs，并在浓度浓度的Darobactin存在下进行了OMPT -NANODISC活性。为了准备ompt -nanodiscs，我们首先将OMPT表示为包容物体，然后使用先前报道的方法55,56重塑了蛋白质。然后，我们使用与BAM所述相同的方法将OMPT掺入纳米盘中。使用0.4μm的OMPT – Nanodiscs进行测定。结果表明，darobactin几乎对OMPT -Nanodisc活动没有影响，因此证实了Darobactin不会影响OMPT活动本身或破坏纳米散发体本身。一式三份实验显示了代表性图。F，WNWSKSF肽不会抑制BAM纳米盘。作为对Darobactin的对照，在浓度增加的线性肽WNWSKSF的情况下，进行了BAM – Nanodisc分析。结果表明，即使在最高浓度下，WNWSKSF肽对BAM – nanodisc活性的影响最小。一式三份实验显示了代表性图。G，H，Darobactin与Bama/BAM的特异性结合。摩尔比是蛋白质：配体比率。G，用darobactin滴定的野生型BAM的ITC实验图。kd =1.2μm，n = 0.52，ΔH= –25 kcal mol -1和δs= -56 cal mol -1 k -1。实验重复两次，结果相似。h，用肽WNWSKSF滴定的野生型BAM的ITC实验图表明，与darobactin使用的浓度范围内没有结合。实验重复两次，结果相似。I，J，在0.1％w/v ldao中为250μMBAMA-β的二维[15N，1H] - 胶谱。I，BAMA-β在不存在（左）的情况下，在摩尔比为1：0.5（中）和1：1（右）的摩尔比：bama-β：darobactin的情况下。红色虚线概述了一个示例光谱区域，该区域在滴定过程中显示出很大的光谱变化。实验重复两次，结果相似。J，Bama-β上的Apo Bama-β（黑色）（250μm）的叠加层和炒的线性肽WNKWSFS（绿色）（230μm）。实验一次进行。　　源数据

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